抗水稻黑条矮缩病转基因材料的鉴定分析
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转基因生物新品种培育重大专项 (2012ZX08009001);教育部创新团队发展计划项目(IRT1239);湖南农业大学大学生创新性实验计划项目(XCX15145)


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    摘要:

    针对水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)的核心粒子外壳蛋白基因(S8)、毒质与非结构蛋白基因(S9)及其嵌合基因(S8&S9)构建了6个RNAi载体,经农杆菌介导转化武陵粳1号获得转基因植株。通过潮霉素溶液浸泡法对转基因植株进行初步筛选,剔除假阳性植株;再通过PCR从DNA水平进行转基因阳性鉴定;进一步通过qRT–PCR从RNA水平进行转基因表达量分析。选取qRT–PCR表达量高的单拷贝纯系S8后代进行灰飞虱传毒试验,结果表明,含有S8 RNAi片段的转基因水稻材料对RBSDV具有一定抗性。

    Abstract:

    Genome segments S8 (encoding minor core capsid protein), S9 (encoding virplasm and non-structual protein) and their chimeric sequences S8&S9 of RBSDV were used to construct six RNAi vectors and transferred into rice cultivar Wulingjing 1 to generate transgenic plants by Agrobacterium-mediated transformation. Transgenic plants were first screened by immersion with hygromycin solution to eliminate the false-positive plants, then identified by PCR genotyping analysis from the DNA level,followed by qRT–PCR analysis of candidate genes at the RNA level. Single-copy transgenic lines with high expression of S8 detected by qRT–PCR were picked up for Laodelphax striatellus-mediated virus transmission test, and the results showed that transgenic lines containing S8 RNAi vector displayed resistance to RBSDV.

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    引证文献
引用本文

尹鲜思,王少岭,崔益平,陈秋红,王国梁,王志龙.抗水稻黑条矮缩病转基因材料的鉴定分析[J].湖南农业大学学报:自然科学版,2016,42(4):.

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  • 在线发布日期: 2016-07-19
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