柑橘叶片蛋白质高效提取与溃疡病PthA蛋白Western blot分析
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国家自然科学基金(30871702); 湖南省科学技术厅重点项目(2008WK2007); 国家现代柑橘技术体系


Extract efficiently citrus leaf protein and western blot for PthA protein of the citrus bacterial canker disease
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    摘要:

    利用三氯乙酸-丙酮法、Tris-HCl提取法、改良的PBS法对柑橘叶片进行蛋白质提取比较研究, 发现改良的PBS法提取蛋白质,不仅提取效率高, 质量好,浓度高,而且杂质干扰较少, 技术操作简单。通过研究确定了一套适用于柑橘叶片蛋白质的提取、定量、凝胶制备、电泳、转膜、封闭、抗体孵育以及显色的Western blot方法。 利用这一方法对转pthA-nls基因的糖橙、转pthA-nls基因的冰糖橙叶片蛋白质进行了研究,发现与抗柑橘溃疡病相关的蛋白PthA在48 kD成功表达。

    Abstract:

    The citrus were used to extract protein and optimized by the TCA-acedone, Tris-HCl extraction and improved method PBS. The result showed the improved PBS extraction method which was designed by our research group was proved to be suitable and economical to extract the high quality protein from citrus and this facile operation can save time. By research, the improved steps of western blot which include modified protein extraction, SDS-PAGE, trarsmembrane, blocked membranes, antibody incubation and color-reaction were confirmed. It was applied to research the transgenic pthA-nls gene sweet orange plants and it turned out the PthA protein which is related to the Xanthomonas axonopodis pv. citri. is 48 kD protein band。

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引用本文

李娜,覃磊,严佳文,陈佩,邓子牛.柑橘叶片蛋白质高效提取与溃疡病PthA蛋白Western blot分析[J].湖南农业大学学报:自然科学版,2010,36(3):300-303.

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  • 收稿日期:
  • 最后修改日期:2010-03-11
  • 录用日期:2010-03-30
  • 在线发布日期: 2010-06-27
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