摘要:通过RT-PCR从水稻叶片中克隆了水稻L-半乳糖内酯脱氢酶(GLDH)的全长基因。序列分析表明水稻GLDH基因全长1752 bp,亚克隆其部分成熟蛋白编码基因(789 bp),利用基因重组技术构建了E.coli/pET30a-GLDHe,经酶切鉴定,DNA测序证实重组质粒构建正确;将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析证实表达出36 kD左右的蛋白。用原核表达蛋白作为抗原免疫家兔制备抗体,用Western-blotting检测抗体的特异性及效价,结果表明抗体血清效价为1:1000,在加IPTG诱导后的菌液中可以杂到相应的蛋白条带(36 kD),在水稻叶片样品中能杂到一条36 kD的蛋白条带。